Каталог приборов

ЛАЗЕРНЫЙ ИММУНОЛЮМИНЕСЦЕНТНЫЙ     АНАЛИЗАТОР КЛЕТОК

Назначение

Автоматизированный анализ иммунокомпетентных клеток , выявление их субпопуляционного состава, исследование ансамблей клеток или других микрообъектов с флуоресцентными метками .

Целью анализа является получение статистических распределений клеток по их индивидуальным параметрам одновременно в двух спектральных диапазонах флуоресценции .

Результаты анализа на приборе подобны результатам цитометрических измерений, проводимых на проточных цитометрах.
 

Краткое описание

•  Суспензия клеток помещается в камеру Горяева, где находится в поле зрения микрообъектива и специализированных видеокамер. Производится р егистрация большого числа изображений полей зрения, автоматически сменяющих друг друга каждую секунду.

•  Анализ образца осуществляется одновременно в двух спектральных диапазонах флуоресценции с использованием сменных светофильтров для красителей FITC , PE , PI . Предусмотрена цифровая спектральная компенсация флуоресценции.

•  С использованием алгоритмов распознавания образов при обработке и анализе изображений проводится автоматическое обнаружение клеток и определение индивидуальных параметров для каждой из них в реальном времени.

•  Результаты анализа отображаются в виде гистограмм и двухпараметрических точечных графиков.

•  Обеспечена работа с регионами (возможность выделения на полученных графиках произвольных областей для последующего исследования), наложение и объединение результатов анализа, визуализация образца (суспензии клеток), идентификация выбранных регионов непосредственно на изображении образца, архивация исходных данных для дальнейшей работы.
 

В проходящем свете измеряется:

Размер — средний диаметр клетки в микрометрах.

Прозрачность — интегральная прозрачность клетки по отношению к буферному раствору.

 

С применением лазера (473 нм) измеряется :

Интенсивность флуоресценции для каждой клетки в двух спектральных диапазонах. Прибор оснащен набором светофильтров: 532 нм, 576 нм, 673 нм.

Измерение параметров осуществляется для каждой клетки индивидуально.

 

 

ПРИМЕРЫ АНАЛИЗА ЛИМФОЦИТОВ НА ПРИБОРЕ ДСКФ-01

 
 

Выявление моноцитов в периферической крови на приборе ДСКФ-01 (метка CD45/CD14). Интенсивность флуоресценции в канале FITC соответствует лейкоцитам, меченным CD 45 (Флуоресценция 1), а PE – моноцитам, меченным CD 14 (Флуоресценция 2)
 

 

  

Анализ лимфоцитов периферической крови человека на ДСКФ-01. Стандартный образец Immuno-Troll-PN-4238091-LA-7587022-20100826, получено относительное содержание лимфоцитов для меток CD3/CD4, CD3/CD8, CD3/CD19, CD3/CD56
 

Стандартный образец Immuno-Troll-PN-4238091-LA-7587022-20100826.
Паспортные значения и результаты, полученные на ДСКФ-01

Стандартный образец Immuno-Troll, популяции и субпопуляции

Паспортное значение, среднее ± СКО, %

Измерено на ДСКФ, отн.содержание, %

CD3+ (Т-лимфоциты)

72 ± 9

69,9

CD3+/CD4+ (Т-хелперы)

46 ± 9

44,2

CD3+/CD8+ (Т-цитотоксические)

22 ± 6

22,1

CD19+ (В-лимфоциты)

15 ± 5

13,3

CD3–/CD56+ (NK-клетки)

12 ± 4

15,9

 

 

ИЗМЕРЕНИЯ КАЛИБРОВОЧНЫХ МИКРОСФЕР НА ПРИБОРЕ ДСКФ-01

 
some charts

Стандартный образец Immuno-BriteTM Standarts Kit/Immuno-BriteTM, Beckman Coulter, Inc. Измерения в каналах флуоресценции FITC и PE

 
 
some charts

Стандартный образец FluoroSpheres K0110, Dako Denmark A/S. Измерения в каналах флуоресценции FITC и PE

 

Особенности

•  Отсутствие проточных систем транспортировки клеток и систем фокусировки и сканирования лазерного пучка, благодаря чему обеспечивается компактность прибора и обеспечивается простота его эксплуатации, а также снижается стоимость прибора.

•  Использование принципов цитометрии по изображениям клеток ( Image Cytometry ). Обнаружение и определение индивидуальных параметров клеток производятся с использованием алгоритмов распознавания образов при обработке и анализе изображений в реальном времени.

•  Возможность визуализации исследуемого образца (режим цифрового микроскопа) для увеличения информативности методик анализа.

•  Возможность наблюдения изменений параметров образца во времени.

•  Имеется возможность повторного анализа данных ранее проведенных экспериментов из архива исходных изображений.

•  Результаты анализа и исходные данные из файлов нескольких однотипных экспериментов могут быть объединены в общий результат для увеличения статистической представительности.
 

Новизна

•  В приборе ДСКФ-01 реализован альтернативный подход к определению индивидуальных параметров клеток, в основе которого лежит автоматизированная регистрация массива изображений суспензии клеток, помещенной в камеру Горяева.

•  Для предварительной обработки фотометрической информации и мультипараметрического анализа клеток применены современные алгоритмы цифровой обработки изображений.

 

Детектор субпопуляций клеток флуоресцентный ДСКФ-01 не имеет аналогов.
 

Основные технические характеристики

Размер анализируемых клеток (объектов), мкм

от 3 до 30

Скорость анализа (при концентрации более 107 кл. / мл), клеток/с

 
> 100

Число градаций интенсивности флуоресценции

> 10 3

Порог обнаружения флуоресценции (краситель FITC ), MEF

< 1·103

Длина волны лазера, нм

437

Полосовые светофильтры при регистрации флуоресценции, нм

532, 576, 673

Габариты прибора (без компьютера), мм

590 x 510 x 290

Масса, кг

22

 

Области применения

Клиническая лабораторная диагностика в иммунологии, аллергологии и онкологии, медицинские и биологические исследования с применением флуоресцентных меток.
 

Разработчики

Разработчик – Институт аналитического приборостроения РАН.

Работа по развитию методических основ применения прибора проводится совместно с ГНЦ «Институт иммунологии ФМБА России».

190103 Russia,St.Petersburg, Rizhsky pr., 26 ; t.: (812) 2518600, fax: (812) 2517038, mail: iap@ianin.spb.su