Автоматизированный анализ иммунокомпетентных клеток , выявление их субпопуляционного состава, исследование ансамблей клеток или других микрообъектов с флуоресцентными метками . Целью анализа является получение статистических распределений клеток по их индивидуальным параметрам одновременно в двух спектральных диапазонах флуоресценции . Результаты анализа на приборе подобны результатам цитометрических
измерений, проводимых на проточных цитометрах.
Суспензия клеток помещается в камеру Горяева, где находится в поле зрения микрообъектива и специализированных видеокамер. Производится р егистрация большого числа изображений полей зрения, автоматически сменяющих друг друга каждую секунду. Анализ образца осуществляется одновременно в двух спектральных диапазонах флуоресценции с использованием сменных светофильтров для красителей FITC , PE , PI . Предусмотрена цифровая спектральная компенсация флуоресценции. С использованием алгоритмов распознавания образов при обработке и анализе изображений проводится автоматическое обнаружение клеток и определение индивидуальных параметров для каждой из них в реальном времени. Результаты анализа отображаются в виде гистограмм и двухпараметрических точечных графиков. Обеспечена работа с регионами (возможность выделения
на полученных графиках произвольных областей для последующего
исследования), наложение и объединение результатов анализа, визуализация
образца (суспензии клеток), идентификация выбранных регионов непосредственно
на изображении образца, архивация исходных данных для дальнейшей
работы.
ПРИМЕРЫ АНАЛИЗА ЛИМФОЦИТОВ НА ПРИБОРЕ ДСКФ-01 Выявление моноцитов в периферической крови на приборе ДСКФ-01 (метка CD45/CD14). Интенсивность флуоресценции в канале FITC
соответствует лейкоцитам, меченным CD 45 (Флуоресценция 1), а PE – моноцитам, меченным CD 14 (Флуоресценция 2)
Анализ лимфоцитов периферической крови человека на ДСКФ-01. Стандартный образец Immuno-Troll-PN-4238091-LA-7587022-20100826,
получено относительное содержание лимфоцитов для меток CD3/CD4, CD3/CD8, CD3/CD19, CD3/CD56 Стандартный образец Immuno-Troll-PN-4238091-LA-7587022-20100826.
ИЗМЕРЕНИЯ КАЛИБРОВОЧНЫХ МИКРОСФЕР НА ПРИБОРЕ ДСКФ-01 Стандартный образец Immuno-BriteTM Standarts Kit/Immuno-BriteTM, Beckman Coulter, Inc. Измерения в каналах флуоресценции FITC и PE Стандартный образец FluoroSpheres K0110, Dako Denmark A/S. Измерения в каналах флуоресценции FITC и PE
Отсутствие проточных систем транспортировки клеток и систем фокусировки и сканирования лазерного пучка, благодаря чему обеспечивается компактность прибора и обеспечивается простота его эксплуатации, а также снижается стоимость прибора. Использование принципов цитометрии по изображениям клеток ( Image Cytometry ). Обнаружение и определение индивидуальных параметров клеток производятся с использованием алгоритмов распознавания образов при обработке и анализе изображений в реальном времени. Возможность визуализации исследуемого образца (режим цифрового микроскопа) для увеличения информативности методик анализа. Возможность наблюдения изменений параметров образца во времени. Имеется возможность повторного анализа данных ранее проведенных экспериментов из архива исходных изображений. Результаты анализа и исходные данные из файлов нескольких
однотипных экспериментов могут быть объединены в общий результат
для увеличения статистической представительности.
В приборе ДСКФ-01 реализован альтернативный подход к определению индивидуальных параметров клеток, в основе которого лежит автоматизированная регистрация массива изображений суспензии клеток, помещенной в камеру Горяева. Для предварительной обработки фотометрической информации и мультипараметрического анализа клеток применены современные алгоритмы цифровой обработки изображений.
Детектор субпопуляций клеток флуоресцентный ДСКФ-01 не имеет
аналогов.
Клиническая лабораторная диагностика в иммунологии, аллергологии
и онкологии, медицинские и биологические исследования с применением
флуоресцентных меток.
Разработчик – Институт аналитического приборостроения РАН. Работа по развитию методических основ применения прибора проводится совместно с ГНЦ «Институт иммунологии ФМБА России». |